反相色譜常用的流動相及其沖洗強度如下： H2O<甲醇<乙腈<乙醇<丙醇<異丙醇<* 常用的流動相組成是："甲醇-H2O"和"乙腈-H2O"，但由于乙腈具有一定的毒性，通常優先考慮"甲醇-H2O"流動相。 反相色譜中，溶質按其疏水性大小進行分離，極性越大疏水性越小的溶質，越不易與非極性的固定相結合，所以先被洗脫下來。

　　反相色譜柱ODS柱具有重現行性好，使用壽命更長，更好的滿足制藥企業和藥物研發對液相色譜柱的嚴格要求。表面有*的硅羥基基團組成，硅烷的覆蓋率高，在高或低的pH條件下不易水解和分解。是一種高純度、大比表面積、高機械強度、較高的碳鏈覆蓋率的新一代球形硅膠填料。金屬不純物含量極低，減少了有些螯合物在硅膠基質柱上的絡合作用。ODS柱是一種常用的反相色譜柱，也叫C18柱；由于它是長鏈烷基鍵合相，有較高的碳含量和更好的疏水性，對各種類型的生物大分子有更強的適應能力，因此在生物化學分析工作中應用的為廣泛。